Біуретовий метод визначення білків

Нефелометричний метод визначення білків

Метод базується на вимірюванні інтенсивності світлового потоку, розсіяного твердими або колоїдними частинками, які знаходяться в розчині у підвішеному стані. За інтенсивністю розсіювання світлового потоку визначають концентрацію зразка. Розчини білків здатні до опалесценції при певних умовах в присутності хімічних реагентів (сульфосаліцилова кислота). Концентрація білка в цьому випадку визначається за ступенем опалесценції. Продукти гідролізу білків (пептони, амінокислоти та ін.) не здатні до опалесценції. Метод досить точний і швидкий, має добру кореляцію з методом К’єльдаля. Визначення оптичної густини досліджуваного розчину проводять за допомогою приладу фотоелектроколориметра (ФЕК).

При нефелометричному методі правильність результатів аналізу залежить від методу одержання суспензії, порядку змішування розчину, швидкості змішування. Тому після додавання сульфосаліцилової кислоти колбу швидко перевертають 2 – 3 рази (не більше), розчин наливають в кювету товщиною шару 5 мм і виміряють величину оптичної густини розчину при довжині хвилі 550 нм. По калібрувальному графіку за оптичною густиною визначають вміст білка. Для перерахунку вмісту білка на СР продукту необхідно визначити масову частку вологи продукту.

Специфічною реакцією на вміст білку є біуретова реакція, яка обумовлюється наявністю поліпептидних зв‘язків (-CO-NH-). Вона одержала свою назву від похідного сечовини – біурета, який утворює в лужному розчині мідного купоросу кольорове з’єднання. Інтенсивність забарвлення пропорційне вмісту пептидних зв’язків, а отже і концентрації білків в розчині.

Речовини з пептидними зв’язками в лужному розчині CuSO₄ утворюють забарвлені комплексні з’єднання (при цьому білки мають фіолетове, пептони і пептиди – червоно-фіолетове забарвлення. Біуретовий метод має декілька модифікацій, які відрізняються умовами екстрагування білка, способом внесення біуретового реактиву та технікою колориметрування. За допомогою приладу фотоелектроколориметра визначають оптичну густину розчину і за калібрувальним графіком визначають вміст білка в продукті (біуретовий метод в модифікації Дженнінгса). Отримані дані перераховують на сухі речовини продукту.

Визначення вмісту білка в молоці на рефрактометрі ИРФ-22

Рефрактометричний метод визначення білка в молоці базується на встановленні різниці показників заломлення досліджуваного молока і розчину, який одержаний після осадження білків розчином хлористого кальцію при кип’ятінні.

Читайте також:

<== попередня сторінка	\|	наступна сторінка ==>
Метод К'єльдаля. Хімізм методу	\|	ТЕОРЕТИЧНІ ОСНОВИ МЕТОДІВ ВИЗНАЧЕННЯ МАСОВОЇ ЧАСТКИ ЖИРУ В ХАРЧОВИХ ПРОДУКТАХ

Не знайшли потрібну інформацію? Скористайтесь пошуком google:

Генерація сторінки за: 0.005 сек.