Визначення вмісту глікозильованого гемоглобіну

Принцип методу.

Обладнання. Штатив з пробірками, піпетки, груші, дозатори, годинник, центрифуга, центрифужні пробірки, пробірки типу Еппендорф, рукавички, спектрофотометр чи фотоелектроколориметр.

Реактиви

1. Щавлева кислота – 0,3 М розчин (молекулярна маса – 90,04): зважують 27 г і доводять об’єм розчину до 1 л.

2. Тіобарбітурова кислота – 0,05 М розчин (молекулярна маса – 144,2): 720 мг тіобарбітурової кислоти розчиняють у дистильованій воді і доводять об’єм до 100 мл.

3. Трихлороцтова кислота – 40% розчин: 40 г трихлороцтової кислоти розчиняють у дистильованій воді і доводять об’єм до 100 мл.

Хід роботи

Для приготування проби необхідно 3–5 мл гепаринізованої венозної крові, яку центрифугують 15 хв при 3 000 об/хв. Відбирають плазму, а еритроцитарну масу тричі промивають фізіологічним розчином, центрифугуючи протягом 5 хв при 3 000 об/хв. Відмиті еритроцити гемолізують дистильованою водою у співвідношені 1:3 і центрифугують 15 хв при 18 000 об/хв. Другий етап досліду – одержання супернатанту. Для цього до 2 мл еритроцитарної маси додають 1 мл 0,03 М розчину щавлевої кислоти. Потім суміш інкубують при 100 °С протягом 1 год, охолоджують і додають 1 мл 40 % розчину трихлороцтової кислоти, обов’язково перемішують і центрифугують 10 хв при 3 000 об/хв.

Далі 2 мл супернатанту змішують з 0,5 мл 0,05 М розчину тіобарбітурової кислоти і суміш інкубують при 40 °С протягом 40 хв. Через 20 хв після закінчення інкубації визначають оптичну густину в 10 мм кюветах проти дистильованої води при довжині хвилі 443 нм. Оптична густина 0,029 відповідає 1 % глікозильованого гемоглобіну.

Читайте також:

<== попередня сторінка	\|	наступна сторінка ==>
Реактиви	\|	Визначення фетального гемоглобіну на мазках крові

Не знайшли потрібну інформацію? Скористайтесь пошуком google:

Генерація сторінки за: 0.003 сек.