• Гідрологія і Гідрометрія
• Господарське право
• Економіка будівництва
• Економіка природокористування
• Економічна теорія
• Земельне право
• Історія України
• Кримінально виконавче право
• Медична радіологія
• Методи аналізу
• Міжнародне приватне право
• Міжнародний маркетинг
• Основи екології
• Предмет Політологія
• Соціальне страхування
• Технічні засоби організації дорожнього руху
• Товарознавство продовольчих товарів

Хід виконання роботи

Приготування препарату-мазка із зубного нальоту.

На предметне скло наносять бактеріологічною петлею краплину стерильного фізіологічного розчину або води, потім обережно знімають зубний наліт сірником (без сірчаної голівки), розтирають у краплині і тонким шаром розподіляють на поверхні скла. Мазок підсушують на повітрі, фіксують і зафарбовують.

Висушування препарату проводять на повітрі або в термостаті. Підігрівати препарат не рекомендується, оскільки при цьому відбувається грубе згортання білків у результаті швидкої втрати вологи; при цьому клітини втрачають природну форму. Під час висушування препарат накривають скляним ковпаком, захищаючи від мух і попадання пилу.

Фіксація висушеного препарату потрібна для забезпечення кращого присипання мікробних клітин до скла, а також для того, щоб убити мікроорганізми, оскільки мертві клітини легше зафарбовуються, ніж живі. Фіксацію препарату проводять над полум’ям спиртівки. Для цього предметне скло беруть за куточки великим і вказівним пальцями і, тримаючи мазком догори, повільно проводять скельце через полум’я не менш, ніж 3 рази. При цьому в сумі мазок повинен перебувати в полум’ї не більше 2 сек. Тривала фіксація може змінити структуру мікробних клітин та їх форму. Якщо ж мазок недостатньо прогріли і погано зафіксували, він змивається зі скла при подальшій обробці.

Для фіксації можна використовувати також різні хімічні сполуки. До них належать:

Абсолютний етиловий спирт – в ньому мазки витримують від 15 хв

до 30 хв.

Спиртово-ефірна суміш (етанол:ефір, 1:1) – в ній мазки витримують

2-5 хв.

Метиленовий або аліловий спирт – мазки в цих спиртах витримують протягом 5 хв.

Фіксація проводиться шляхом занурювання мазка в кювету з однією із вищесказаних речовин або наливанням цих речовин на мазок.

Зафарбовування препарату - мазка

А. Метод звичайного зафарбовування.

Для зафарбовування використовують, як правило, який-небудь розчин для забарвлення, найчастіше – фуксин Пфейффера або метиленовий синій.

Методика зафарбовування: на фіксиновий препарат піпеткою наносять декілька крапель забарвлюючого розчину так, щоб покрити всю поверхню мазка: фуксин Пфейффера на 1-2 хв., метиленовий синій – на 3-5 хв. Після цього фарбу змивають водою, а мазок просушують між листами фільтрувального паперу або на повітрі.

Б. Складні методи зафарбовування.

Ці методи використовують з метою діагностики, для виявлення відмінних структур мікробів у тих випадках, коли мікроби не зафарбовуються простим методом.

Зафарбовування за Грамом.

На мазок, який виготовлений і фіксований за звичайною методикою кладуть смужку фільтрувального паперу (трішки вужчу і коротшу за предметне скло) і на неї наливають карболовий розчин генціанвіолету або кристалвіолету на 2 хв. Після цього папір знімають, фарбу зливають і на препарат наливають розчин Люголя на 2 хв. При цьому мазок чорніє. Зливають розчин Люголя і обробляють мазок 96%-ним етанолом 30 хв. Промивають водою. Знову додатково зафарбовують фуксином Пфейффера протягом 2 хв. Промивають водою, сушать і мікроскопують.

Грампозитивні мікроби забарвлюються в темно-фіолетовий, майже чорний колір, грамнегативні – в рожево-червоний.

Довідка. Кулясті форми мікробів (коки) в основному фарбуються за Грамом позитивно, звивисті – негативно. Серед паличкоподібних форм мікробів зустрічаються як грам позитивні, так і грам негативні (палички, які утворюють спори, зафарбовуються, як правило, позитивно). Щоб отримати правильне забарвлення бактерій, рекомендовано фарбувати молоді (добові) культури мікробів; старі культури дають не однакові результати при фарбуванні цим методом.

Запитання для контролю знань

1. Які барвники використовують для фарбування бактерій?

2. Яка методика приготування мазка із культури бактерій, вирощених на щільному поживному середовищі?

3. Пояснити суть забарвлення бактерій за методом Грама.

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА №3

Читайте також:

1. II. Вимоги безпеки перед початком роботи
2. II. Вимоги безпеки праці перед початком роботи
3. III. Виконання бюджету
4. III. Вимоги безпеки під час виконання роботи
5. III. Вимоги безпеки під час виконання роботи
6. III. Вимоги безпеки під час виконання роботи
7. Internet. - це мережа з комутацією пакетів, і її можна порівняти з організацією роботи звичайної пошти.
8. IV. Вимоги безпеки під час роботи на навчально-дослідній ділянці
9. IV. Вимоги безпеки після закінчення роботи
10. IV. Вимоги безпеки після закінчення роботи
11. IІІ. Послідовність виконання курсової роботи
12. S Визначення оптимального темпу роботи з урахуванням динаміки наростання втоми.

Переглядів: 562