Аналіз дослідних проб проводять із постановкою калібрувальної та “сліпої” проб за такою схемою:
Розчин
Дослідна проба
Калібрувальна проба
“Сліпа” проба
Сироватка, мл
0,02
-
-
Калібрувальний розчин глюкози (10 ммоль/л), мл
-
0,02
-
Реагент, мл
3,5
3,5
3,5
Реакцію запускають додаванням робочого реагенту в точно фіксований час із інтервалом, наприклад в 30 с між пробами.
Зупиняють реакцію через 10 хв інкубації при кімнатній температурі додаванням до всіх проб по 0,5 мл 0,8 М НСl у тій часовій послідовності, яка витримувалась при внесенні робочого реагенту.
Проби фотометрують при λ = 450 нм проти “сліпої” проби. Реакційна суміш перед додаванням кислоти має блакитне забарвлення, яке в кислому середовищі переходить у жовте.
Розрахунок концентрації глюкози (в ммоль/л) у кожній дослідній пробі проводять за калібрувальною пробою за формулою:
де Ед і Екл – оптичні густини дослідної та калібрувальної проб, відповідно, виміряні проти “сліпої” проби; 10 – концентрація глюкози в калібрувальному розчині.