Проколюють шкіру пальця. Першу краплю знімають. Капіляр або піпетку Салі промивають фізіологічним розчином, потім ретельно видувають залишки цього розчину. Набирають 0,02 мл крові і вносять у пробірку з 5 мл трансформувального розчину, капіляр промивають два-три рази верхнім шаром розчину, перемішують і залишають на 20 хв. Найчастіше використовують співвідношення 1:250 (0,02 мл цільної крові і 5 мл реактиву).
Паралельно можна ставити одну стандартну пробу з концентрацією 150 г/л – для внутрішньо лабораторного контролю та перевірки метрологічної відповідності вимірювань.
Екстинкцію вимірюють через 20 хв, які потрібні для повного перетворення гемоглобіну в ціанметгемоглобін, при довжині хвилі 540 нм (зелений світлофільтр) у кюветі шириною 10 мм проти контролю – трансформувального розчину чи дистильованої води на спектрофотометрі чи фотоелектроколориметрі.
Отриманий показник оптичної густини (Е540) множать на коефіцієнт 36,77 і обчислюють концентрацію гемоглобіну у грам-процентах (г%):
СНв = Е540 × 36,77.
· Визначення концентрації гемоглобіну в гемолізатах гемоглобіноціанідним методом
Принцип методу. У разі гемолізу відмитих еритроцитів під впливом калій залізосинеродистого гемоглобін в гемолізатах окиснюється в метгемоглобін, який утворює з ацетонціангідрином забарвлену речовину – геміглобінціанід – речовину стійку, інтенсивність забарвлення якої пропорційна вмістові гемоглобіну. Концентрацію ціанметгемоглобіну вимірюють фотометрично.
Обладнання. Вата, скарифікатори, штатив з пробірками, піпетки, груші, дозатори, годинник, центрифуга, центрифужні пробірки, пробірки типу Еппендорф, рукавички.