1. На фіксований мазок кладуть просочений фарбою генціанвіолету фільтрований папір і наносять 2-3 краплі дистильованої води і через 2 хвилини його знімають, а залишки фарби зливають.
2. На мазок наносять розчин Люголя і через 2 хвилини його зливають.
3. Мазок знебарвлюють 96% етиловим спиртом, наносячи його на 20-30 сек.
4. Мазок ретельно промивають водою.
5. На 1-2хв наносять фуксин Пфейфера. Фарбу змивають, а препарат висушують, і мікроскопують. Грампозитивні мікроби фарбуються у фіолетовий колір, і грамнегативні у червоний.
Для фарбування за Грамом студенти готують мазок із суміші мікробів (Bac. Megaterium i E. coli) або прокислого пива (плівка на поверхні пива – оцтовокислі бактерії, внизу розміщуються дріжджі). На склі культуру змішують, мазок висушують, фіксують і фарбують за Грамом. Кишечна паличка і оцтовокислі бактерії – грам негативні; капустяна бацила і дріжджі – грампозитивні.
Питання для самоперевірки
1. Які фарби використовуються в мікробіологічній практиці?
2. Структура, хімічний склад та функції клітинної стінки бактерій. Відмінності в будові клітинної стінки у грампозитивних та грамнегативних бактерій.
3. Яке значення в мікробіології має метод фарбування мікробів за Грамом?