ІV. Обчислення результатів

ІІІ. Досліджувана проба

ІІ. Побудова калібрувального графіка

Визначення загального білка за біуретовою реакцією

Принцип методу: Білки реагують в лужному середовищі з сульфатом купру му (ІІ) з утворенням сполук, забарвлених у фіолетовий колір (біуретова реакція). Ця реакція обумовлена наявністю пептидної групи:

Комплекси купруму з білками ‑ забарвлені сполуки, що мають максимум поглинання при 540 – 580 та 615 – 670 нм. За допомогою біуретової реакції можна визначити концентрацію білка у пробі 10^-5 – 10^-4М.

І. Розчини:10%-ий розчин альбуміну; біуретовий реактив суміш КNaC₄H₄O₆, гідроксиду натрію, CuSO₄•5H₂O та КІ). Зберігають його у посудині з темного скла не більше двох тижнів.

Для побудови калібрувального графіка використовують два ряди пробірок по 4 штуки в кожному, а одну пробірку ‑ для контролю. Перший ряд пробірок використовується для розведення вихідного 10%-вого розчину альбуміну. Другий ряд пробірок використовують для проведення якісної реакції. Як контрольний розчин використовують розчин робочого біуретового реактиву. До 5,0мл робочого біуретового реактиву додають 0,1мл 0,9%-вого розчину NaCI. Калібрувальний графік будують на міліметровому папері, відкладаючи одержані дані у координатах (D,С).

До 5мл робочого розчину біуретового реактиву додають 0,1мл сироватки крові або супернатанту, перемішують, запобігаючи утворенню піни. Через 30 – 60 хвилин вимірюють оптичну густину на ФЕК в кюветі шириною 1см при довжині хвилі 540 – 560 нм (зелений світлофільтр) проти контрольного розчину.

Концентрацію білка в досліджуваній пробі (С_експ.) визначають за калібрувальним графіком або за формулою:

де D_експ. – поглинання досліджуваної проби; D_ст. – поглинання стандартного розчину білка;

С_ст. – концентрація в стандартному розчині білка, г%.

Читайте також:

<== попередня сторінка	\|	наступна сторінка ==>
Визначення вмісту загального та білкового азоту за методом Кьєльдаля	\|	Функціональні властивості білків

Не знайшли потрібну інформацію? Скористайтесь пошуком google:

Генерація сторінки за: 0.005 сек.