• Гідрологія і Гідрометрія
• Господарське право
• Економіка будівництва
• Економіка природокористування
• Економічна теорія
• Земельне право
• Історія України
• Кримінально виконавче право
• Медична радіологія
• Методи аналізу
• Міжнародне приватне право
• Міжнародний маркетинг
• Основи екології
• Предмет Політологія
• Соціальне страхування
• Технічні засоби організації дорожнього руху
• Товарознавство продовольчих товарів

Визначення загального білка сироватки крові за біуретовою реакцію

Принцип методу. Білки реагують у лужному середовищі з іонами Купруму(ІІ), утворюючи сполуки, забарвлені у фіолетовий колір.

Обладнання. Фотоелектроколориметр КФК-3, штатив з пробірками, піпетки, кювети, міліметровий папір.

Реактиви

1. Натрій хлорид – 0,9 % розчин.

2. Натрій гідроксид – 0,2 н розчин без карбон(IV) оксиду (20 мл 1 н розчину NaOH доводять до 100 мл перевареною дистильованою водою).

3. Біуретовий реактив: 4,5 г сегнетової солі (KNaC₄H₄O₆) розчиняють у 40 мл 0,2 н NaOH. Після розчинення додають 1,5 г CuSO₄×5H₂O та 0,5 г KI. Розчин доводять до 100 мл 0,2 н NaOH. Зберігають у темному місці (або у посудині з темного скла). Реактив можна використовувати протягом місяця.

4. Калій йодистий – 0,5 % розчин у 0,2 н розчині натрій гідроксиду (0,5 г KI розчиняють у 100 мл 0,2 н NaOH). Зберігають у посудині з темного скла не більше двох тижнів.

5. Робочий розчин біуретового реактиву: 20 мл біуретового рективу (№ 3) змішують з 80 мл розчину № 4. Зберігають у посудині з темного скла не більше двох тижнів.

6. Стандартний розчин альбуміну (з сироватки людини або бика) – 0,1 г/мл приготовлений на 0,9 % розчині NaСl: 1 г альбуміну розчиняють (у невеликому циліндрі чи точній мірній пробірці) у 6–7 мл в 0,9 % розчині NaСl і доводять кінцевий об’єм фізіологічним розчином до 10 мл; 1 мл стандартного розчину містить 0,1 г білка.

Хід роботи

До 5 мл робочого розчину біуретового реактиву додають (обережно, щоб не утворювалась піна) 0,1 мл сироватки крові. Через 30 хв, щонайпізніше через 1 год, пробу колориметрують на фотоелектроколориметрі у кюветі товщиною 1 см при λ = 546 нм проти контролю, який готують шляхом додавання 0,1 мл 0,9 % розчину NaСl до 5 мл робочого розчину біуретового реактиву. Концентрацію загального білка сироватки крові обчислюють за калібрувальним графіком.

Побудова калібрувального графіка. Зі стандартного розчину альбуміну (0,1 г/мл) готують робочі розчини з різною концентрацією білка (див. таблицю). З кожного розведення беруть по 0,1 мл робочого розчину і вносять у пробірки, які містять по 5 мл робочого розчину біуретового реактиву. Через 30–60 хв екстинкцію стандартних проб вимірюють на ФЕКу проти контролю (“сліпої проби”) (див. хід роботи, п. 1).

Читайте також:

1. I визначення впливу окремих факторів
2. II. Визначення мети запровадження конкретної ВЕЗ з ураху­ванням її виду.
3. II. Мотивація навчальної діяльності. Визначення теми і мети уроку
4. Ocнoвнi визначення здоров'я
5. S Визначення оптимального темпу роботи з урахуванням динаміки наростання втоми.
6. Абсолютний фагоцитоз або елімінуюча здатність крові (ЕЗК) — це кількість фагоцитованих мікробних клітин лейкоцитами 1 мкл крові.
7. Адаптація крові до фізичних навантажень
8. Алгебраїчний спосіб визначення точки беззбитковості
9. Алгоритм побудови калібрувального графіка для визначення загального білка сироватки крові
10. Алгоритм побудови калібрувального графіка для визначення загального білка сироватки крові
11. Аналіз існуючих виробів та визначення завдань проекту
12. Аналіз комплексних статей витрат: витрат на утримання та експлуатацію устаткуван­ня, цехові, загальногосподарські, поза виробничі витрати.

Переглядів: 1144