Студопедия
Новини освіти і науки:
МАРК РЕГНЕРУС ДОСЛІДЖЕННЯ: Наскільки відрізняються діти, які виросли в одностатевих союзах


РЕЗОЛЮЦІЯ: Громадського обговорення навчальної програми статевого виховання


ЧОМУ ФОНД ОЛЕНИ ПІНЧУК І МОЗ УКРАЇНИ ПРОПАГУЮТЬ "СЕКСУАЛЬНІ УРОКИ"


ЕКЗИСТЕНЦІЙНО-ПСИХОЛОГІЧНІ ОСНОВИ ПОРУШЕННЯ СТАТЕВОЇ ІДЕНТИЧНОСТІ ПІДЛІТКІВ


Батьківський, громадянський рух в Україні закликає МОН зупинити тотальну сексуалізацію дітей і підлітків


Відкрите звернення Міністру освіти й науки України - Гриневич Лілії Михайлівні


Представництво українського жіноцтва в ООН: низький рівень культури спілкування в соціальних мережах


Гендерна антидискримінаційна експертиза може зробити нас моральними рабами


ЛІВИЙ МАРКСИЗМ У НОВИХ ПІДРУЧНИКАХ ДЛЯ ШКОЛЯРІВ


ВІДКРИТА ЗАЯВА на підтримку позиції Ганни Турчинової та права кожної людини на свободу думки, світогляду та вираження поглядів



Реактиви

1. Етиловий спирт – 70 º розчин.

2. Фізіологічний розчин – 0,9 % розчин натрій хлориду.

3. Натрій цитрат – 5 % розчин.

4. Натрій гідроксид – 0,1 н розчин (рН 12,7), зберігають у запарафінованій пляшці в холодильнику.

5. Амоній сульфат – 50 % розчин: до 100 мл розчину (NН4)2S04 додають 0,85 мл концентрованої хлоридної кислоти.

6. Аміак – 0,04 % розчин: 0,40 мл 25 % аміаку доводять до 25 мл дистильованою водою.

Хід роботи

Отримують кров шляхом скарифікації шкіри пальця. Готують цитратну кров: до 500 мкл крові додають 50 мкл 5 % розчину натрій цитрату (правильне співвідношення крові і антикоагулянту (в даному випадку натрій цитрату) 10:1. Кров з антикоагулянтом переносять у центрифужні пробірки. Якщо об’єм крові невеликий (від 0,2 до 0,5 мл), то можна проводити центрифугування в пробірках типу Еппендорф. Еритроцити відділяють від плазми крові шляхом центрифугування при 3 000 об/хв протягом 5 хв. Верхній шар (плазма) відсмоктують пастерівською піпеткою або за допомогою шприца з довгою голкою і виливають. Еритроцити тричі промивають охолодженим фізіологічним розчином (0,9 % розчин натрій хлористого) при 3 000 об/хв по 5 хв. Відмиті еритроцити гемолізують дистильованою водою у співвідношенні 1:2 (еритроцитарна маса : дистильована вода). Суміш перемішують протягом 10 хв і центрифугують 10 хв при 8 000 об/хв для відділення стром еритроцитів. За допомогою шприца з довгою голкою відбирають супернатант (гемолізат) і переносять в чисту пробірку Еппендорф.

До 0,2 мл водного розчину гемолізату додають 1,8 мл 0,1 н NаОН і секундоміром фіксують час 1 хв. Через 1 хв проводять осадження, додаючи 4,0 мл 50 % розчину амоній сульфату. Відразу після цього суміш добре перемішують і фільтрують через подвійний знезолений фільтр. На фільтрі залишається гемоглобін А, а фільтрат містить гемоглобін F, який визначають спектрофотометрично при довжині хвилі 541 нм.

Контрольну пробу, за якою обчислюють загальний вміст гемоглобінів (А + F), готують так: до 0,1 мл гемолізату додають 5,9 мл 0,04 %розчину NН4ОН і міряють екстинкцію при довжині хвилі 541 нм. Процент гемоглобіну F розраховують за формулою:

де Е1 – екстинкція досліджуваного розчину після осадження гемоглобіну А; Е2 – екстинкція контрольної проби; 2 – коефіцієнт для порівняння концентрацій.

§ Метод К. Зінгера у модифікації Н. О. Сибірної

Обладнання. Вата, скарифікатори, штатив з пробірками, піпетки, груші, дозатори, годинник, центрифуга, центрифужні пробірки, пробірки типу Еппендорф, знезолений фільтр, лійка, рукавички.


Читайте також:

  1. Реактиви
  2. Реактиви
  3. Реактиви
  4. Реактиви
  5. Реактиви
  6. Реактиви
  7. Реактиви
  8. Реактиви
  9. Реактиви
  10. Реактиви
  11. Тонічним розчином натрію хлориду (1 :500, 1 : 700), а потім додають реактиви, які викликають лізис еритроцитів (сапонін, сапоглобін).




Переглядів: 646

<== попередня сторінка | наступна сторінка ==>
Визначення вмісту лужностійкого гемоглобіну | Реактиви

Не знайшли потрібну інформацію? Скористайтесь пошуком google:

  

© studopedia.com.ua При використанні або копіюванні матеріалів пряме посилання на сайт обов'язкове.


Генерація сторінки за: 0.002 сек.