МАРК РЕГНЕРУС ДОСЛІДЖЕННЯ: Наскільки відрізняються діти, які виросли в одностатевих союзах
РЕЗОЛЮЦІЯ: Громадського обговорення навчальної програми статевого виховання ЧОМУ ФОНД ОЛЕНИ ПІНЧУК І МОЗ УКРАЇНИ ПРОПАГУЮТЬ "СЕКСУАЛЬНІ УРОКИ" ЕКЗИСТЕНЦІЙНО-ПСИХОЛОГІЧНІ ОСНОВИ ПОРУШЕННЯ СТАТЕВОЇ ІДЕНТИЧНОСТІ ПІДЛІТКІВ Батьківський, громадянський рух в Україні закликає МОН зупинити тотальну сексуалізацію дітей і підлітків Відкрите звернення Міністру освіти й науки України - Гриневич Лілії Михайлівні Представництво українського жіноцтва в ООН: низький рівень культури спілкування в соціальних мережах Гендерна антидискримінаційна експертиза може зробити нас моральними рабами ЛІВИЙ МАРКСИЗМ У НОВИХ ПІДРУЧНИКАХ ДЛЯ ШКОЛЯРІВ ВІДКРИТА ЗАЯВА на підтримку позиції Ганни Турчинової та права кожної людини на свободу думки, світогляду та вираження поглядів
Контакти
Тлумачний словник Авто Автоматизація Архітектура Астрономія Аудит Біологія Будівництво Бухгалтерія Винахідництво Виробництво Військова справа Генетика Географія Геологія Господарство Держава Дім Екологія Економетрика Економіка Електроніка Журналістика та ЗМІ Зв'язок Іноземні мови Інформатика Історія Комп'ютери Креслення Кулінарія Культура Лексикологія Література Логіка Маркетинг Математика Машинобудування Медицина Менеджмент Метали і Зварювання Механіка Мистецтво Музика Населення Освіта Охорона безпеки життя Охорона Праці Педагогіка Політика Право Програмування Промисловість Психологія Радіо Регилия Соціологія Спорт Стандартизація Технології Торгівля Туризм Фізика Фізіологія Філософія Фінанси Хімія Юриспунденкция |
|
|||||||
Реактиви1. Етиловий спирт – 70 º розчин. 2. Фізіологічний розчин – 0,9 % розчин натрій хлориду. 3. Натрій цитрат – 5 % розчин. 4. Натрій гідроксид – 1,2 н розчин. 5. Розчин Драбкіна: NаНСО3 – 1 г; КСN – 0,05 г; К3[Fe(CN)6] – 0,2 г; дистильованої води – до 1,0 л. 6. Амоній сульфат – насичений розчин: однакові об’єми (NН4)2S04 і дистильованої води нагрівають протягом 10 хв до +70 ºС, гарячий розчин фільтрують; при охолодженні амоній сульфат викристалізовується. Хід роботи Отримують кров шляхом скарифікації шкіри пальця. Готують цитратну кров: до 0,1–0,2 мл крові додають 0,01–0,02 мл 5,0 % розчину натрій цитрату (правильне співвідношення крові і антикоагулянту (в даному випадку натрій цитрату) 10:1). Кров з антикоагулянтом переносять у пробірки типу Еппендорф. Еритроцити відділяють від плазми крові шляхом центрифугування цитратної крові в пробірках Еппендорф при 3 000 об/хв протягом 5 хв. Верхній шар плазми відсмоктують за допомогою шприца з довгою голкою і виливають. Еритроцити тричі промивають охолодженим фізіологічним розчином (0,9 % розчин натрій хлористого) при 3 000 об/хв по 5 хв. Відмиті еритроцити гемолізують дистильованою водою, додаючи до 0,05 мл еритроцитарної маси 0,10 мл дистильованої води. Суміш перемішують протягом 10 хв і центрифугують 10 хв при 8 000 об/хв для відділення стром еритроцитів. За допомогою шприца з довгою голкою відбирають супернатант (гемолізат) і переносять в чисту пробірку Еппендорф. Для визначення концентрації гемоглобіну з отриманого гемолізату відбирають 0,02 мл, додають 5 мл розчину Драбкіна і через 20 хв вимірюють екстинкцію розчину при довжині хвилі 540 нм (зелений світлофільтр) у кюветі шириною 10 мм проти контролю – розчину Драбкіна на фотоелектроколориметрі. Концентрацію гемоглобіну обчислюють за формулою: СНв = Е540 × 251 × 1,45, де СНв – концентрація гемоглобіну в гемолізаті, г/л, або мг/мл; 251 – розведення; 1,45 – коефіцієнт перерахунку. Отже, гемоглобін, який містився в отриманому гемолізаті перевели у ціанметформу і визначити його концентрацію. Якщо в гемолізаті міститься приблизно 10 г% гемоглобіну, то до отриманого розчину ціанметгемоглобіну додають реактив Драбкіна до кінцевої концентрації 0,5 г%. Приклад розрахунку. Розведення ціанметгемоглобіну = 10 г% / 0,5 г% = 20 раз. Таким чином, з 5 мл розчину ціанметгемоглобіну, який фотометрували, відбираємо 0,5 мл і доводимо до 10 мл реактивом Драбкіна. Відбирають 2,8 мл розведеного розчину ціанметгемоглобіну і ретельно змішують з 0,2 мл 1,2 н NаОН. Рівно через 2 хв додають 2,0 мл насиченого розчину амоній сульфату. Старанно перемішують вміст пробірки. Гемоглобін А випадає в осад, а гемоглобін F залишається у розчині. Осад відфільтровують через подвійний фільтр. Отриманий фільтрат фотометрують Е1 проти холостої проби при довжині хвилі 540 нм. Холосту пробу готують так: 0,4 мл 0,5 г% розчину ціанметгемоглобіну змішують з 6,75 мл дистильованої води. Ця проба дає екстинкцію вихідної кількості гемоглобіну Е2 (у співвідношенні 1:10). Розрахунки проводять за формулою:
Читайте також:
|
||||||||
|