• Гідрологія і Гідрометрія
• Господарське право
• Економіка будівництва
• Економіка природокористування
• Економічна теорія
• Земельне право
• Історія України
• Кримінально виконавче право
• Медична радіологія
• Методи аналізу
• Міжнародне приватне право
• Міжнародний маркетинг
• Основи екології
• Предмет Політологія
• Соціальне страхування
• Технічні засоби організації дорожнього руху
• Товарознавство продовольчих товарів

Визначення фетального гемоглобіну на мазках крові

Принцип методу. Гемоглобін А елюють з мазків крові лимонно-кисло-фосфатним буфером, а фетальний гемоглобін еритроцитів периферичної крові, який залишається після елюції, дофарбовують метилвіолетом. При цьому фетальний гемоглобін забарвлюється у фіолетовий колір.

Обладнання. Вата, скарифікатори, предметні скельця, шліфоване скло, скляні палички, піпетки, груші, дозатори, кювета для забарвлення препаратів, скляні палички, секундомір, мікроскоп, рукавички.

Реактиви

1. Етиловий спирт – 80 % розчин.

2. Лимонно-кисло-фосфатний буфер (рН 3,2) для елюції: змішують 24,7 частин 0,2 М розчину Nа₂НРО₄ (356 г Nа₂НРО₄×2Н₂О в 1 л дистильованої води) та 75,3 частини 0,1 М розчину лимонної кислоти (21,01 г лимонної кислоти в 1 л дистильованої води).

3. Метилвіолет – 1 % водний розчин.

Хід роботи

Отримують кров шляхом скарифікації шкіри пальця. Виготовляють мазки крові (див. п. 2.1.2.8). Висушений тонкий мазок капілярної крові фіксують протягом 5 хв у 80 % етиловому спирті (можна робити мазок із крові, взятої з антикоагулянтом і розведеної фізіологічним розчином у співвідношенні 1:3). Сліди спирту змивають дистильованою водою, мазок висушують і елюють протягом 5 хв у буферному розчині. Розчин заздалегідь нагрівають протягом 30 хв при +37°С для видалення газів, які заважають елюції гемоглобіну А з мазка крові.

Під час елюції гемоглобіну А буферний розчин потрібно помішувати скляною паличкою для видалення пухирців газу з поверхні мазка. Елюйований мазок споліскують дистильованою водою і фарбують 1 % водним розчином метилвіолету протягом 2 хв, після чого препарат промивають водою і висушують.

При описаній методиці фарбування еритроцити, які містять фетальний гемоглобін (НЬF), пофарбовані у яскраво-ліловий (фіолетовий) колір, а еритроцити, що містили гемоглобін А – гемоглобін дорослого, видно у слідових кількостях. Еритроцити підраховують у кількості не меншій ніж 200 клітин, і обчислюють процентне співвідношення еритроцитів, що містять різні форми гемоглобіну.

Клініко-діагностичне значення. Трапляються еритроцити з різною інтенсивністю забарвлення у фіолетовий колір. Можна припустити, що фетальний гемоглобін у них міститься у різних концентраціях одночасно з гемоглобіном дорослих. Аналіз вмісту фетального гемоглобіну у крові важливий для діагностики деяких патологічних станів (анемія Кулі, серпоподібно-клітинна анемія, мікросфероцитарна анемія, гострі і хронічні лейкози, мієломна хвороба).

Читайте також:

1. I визначення впливу окремих факторів
2. II. Визначення мети запровадження конкретної ВЕЗ з ураху­ванням її виду.
3. II. Мотивація навчальної діяльності. Визначення теми і мети уроку
4. Ocнoвнi визначення здоров'я
5. S Визначення оптимального темпу роботи з урахуванням динаміки наростання втоми.
6. Абсолютний фагоцитоз або елімінуюча здатність крові (ЕЗК) — це кількість фагоцитованих мікробних клітин лейкоцитами 1 мкл крові.
7. Адаптація крові до фізичних навантажень
8. Алгебраїчний спосіб визначення точки беззбитковості
9. Алгоритм побудови калібрувального графіка для визначення загального білка сироватки крові
10. Алгоритм побудови калібрувального графіка для визначення загального білка сироватки крові
11. Аналіз існуючих виробів та визначення завдань проекту
12. Аналіз службового призначення деталей та конструктивних елементів обладнання харчових виробництві, визначення технічних вимог і норм точності при їх виготовленні

Переглядів: 838