Визначення фетального гемоглобіну на мазках крові

Принцип методу. Гемоглобін А елюють з мазків крові лимонно-кисло-фосфатним буфером, а фетальний гемоглобін еритроцитів периферичної крові, який залишається після елюції, дофарбовують метилвіолетом. При цьому фетальний гемоглобін забарвлюється у фіолетовий колір.

Обладнання. Вата, скарифікатори, предметні скельця, шліфоване скло, скляні палички, піпетки, груші, дозатори, кювета для забарвлення препаратів, скляні палички, секундомір, мікроскоп, рукавички.

Реактиви

1. Етиловий спирт – 80 % розчин.

2. Лимонно-кисло-фосфатний буфер (рН 3,2) для елюції: змішують 24,7 частин 0,2 М розчину Nа₂НРО₄ (356 г Nа₂НРО₄×2Н₂О в 1 л дистильованої води) та 75,3 частини 0,1 М розчину лимонної кислоти (21,01 г лимонної кислоти в 1 л дистильованої води).

3. Метилвіолет – 1 % водний розчин.

Хід роботи

Отримують кров шляхом скарифікації шкіри пальця. Виготовляють мазки крові (див. п. 2.1.2.8). Висушений тонкий мазок капілярної крові фіксують протягом 5 хв у 80 % етиловому спирті (можна робити мазок із крові, взятої з антикоагулянтом і розведеної фізіологічним розчином у співвідношенні 1:3). Сліди спирту змивають дистильованою водою, мазок висушують і елюють протягом 5 хв у буферному розчині. Розчин заздалегідь нагрівають протягом 30 хв при +37°С для видалення газів, які заважають елюції гемоглобіну А з мазка крові.

Під час елюції гемоглобіну А буферний розчин потрібно помішувати скляною паличкою для видалення пухирців газу з поверхні мазка. Елюйований мазок споліскують дистильованою водою і фарбують 1 % водним розчином метилвіолету протягом 2 хв, після чого препарат промивають водою і висушують.

При описаній методиці фарбування еритроцити, які містять фетальний гемоглобін (НЬF), пофарбовані у яскраво-ліловий (фіолетовий) колір, а еритроцити, що містили гемоглобін А – гемоглобін дорослого, видно у слідових кількостях. Еритроцити підраховують у кількості не меншій ніж 200 клітин, і обчислюють процентне співвідношення еритроцитів, що містять різні форми гемоглобіну.

Клініко-діагностичне значення. Трапляються еритроцити з різною інтенсивністю забарвлення у фіолетовий колір. Можна припустити, що фетальний гемоглобін у них міститься у різних концентраціях одночасно з гемоглобіном дорослих. Аналіз вмісту фетального гемоглобіну у крові важливий для діагностики деяких патологічних станів (анемія Кулі, серпоподібно-клітинна анемія, мікросфероцитарна анемія, гострі і хронічні лейкози, мієломна хвороба).

Читайте також:

<== попередня сторінка	\|	наступна сторінка ==>
Визначення вмісту глікозильованого гемоглобіну	\|	Серологічні дослідження крові

Не знайшли потрібну інформацію? Скористайтесь пошуком google:

Генерація сторінки за: 0.004 сек.