Студопедия
Новини освіти і науки:
МАРК РЕГНЕРУС ДОСЛІДЖЕННЯ: Наскільки відрізняються діти, які виросли в одностатевих союзах


РЕЗОЛЮЦІЯ: Громадського обговорення навчальної програми статевого виховання


ЧОМУ ФОНД ОЛЕНИ ПІНЧУК І МОЗ УКРАЇНИ ПРОПАГУЮТЬ "СЕКСУАЛЬНІ УРОКИ"


ЕКЗИСТЕНЦІЙНО-ПСИХОЛОГІЧНІ ОСНОВИ ПОРУШЕННЯ СТАТЕВОЇ ІДЕНТИЧНОСТІ ПІДЛІТКІВ


Батьківський, громадянський рух в Україні закликає МОН зупинити тотальну сексуалізацію дітей і підлітків


Відкрите звернення Міністру освіти й науки України - Гриневич Лілії Михайлівні


Представництво українського жіноцтва в ООН: низький рівень культури спілкування в соціальних мережах


Гендерна антидискримінаційна експертиза може зробити нас моральними рабами


ЛІВИЙ МАРКСИЗМ У НОВИХ ПІДРУЧНИКАХ ДЛЯ ШКОЛЯРІВ


ВІДКРИТА ЗАЯВА на підтримку позиції Ганни Турчинової та права кожної людини на свободу думки, світогляду та вираження поглядів



Контакти
 


Тлумачний словник






Детекція послідовності

Реакція секвенування

Секвенування

Всі великі проекти секвенування використовують метод Сенгера

На підставі дії ДНК-полімерази

- потрібна ДНК-матриця і праймери

- полімераза і нуклеотиди

Полімераза додає нуклеотиди у відповідності до матриці

Включено невелику кількість нуклеотидних аналогів

--зупинка синтезу

Нобелівські премії були присуджені за два різних метода визначення послідовності ДНК. Метод, розроблений Максом і Гілбертом використовує хімічні засоби розривання ланцюгів ДНК в певних основах. Він потужним і точним, але цей метод вимагає використання токсичних хімічних речовин. Метод, розроблений Фредом Сенгером використовує фермент, відповідальний за реплікацію ДНК, ДНК-полімеразу. Завдяки своїй простоті, всі великі проекти секвенування сьогодні використовують метод Сенгера. Для подовженого ДНК, ДНК-полімераза потребує ДНК-матриці і праймерів. Вона також потребує вільних нуклеотидів. При відповідній температурі і концентрації солі, ДНК-полімераза буде додати відповідні нуклеотидні навпроти матричної основи. Нуклеотиди додані у відповідності з додатковими правилами розробленими Уотсон і Крик: А протилежний T, C протилежної G, і навпаки для обох пар. Для проведення реакції секвенування, невелика кількість нуклеотидних аналогів додається. Коли включений в зростаючий ланцюг ДНК, нуклеотидна аналогія - синтез зупиняється, тому що ДНК-полімераза не може додати ще одну основу в аналогічну.

 

Метод ланцюгової термінації ( зупинки)

- використовуються дидезоксі нуклеотиди

При додаванні потрібної кількості – ланцюг зупиняється

- кожен раз коли основа прикріпляеться до матриці

Потрібна реакція для кожної основи: A, T, C і G.

На завершення метод зупинки ланцюга Сенгер, нуклеотидні аналоги називаються дидеоксінуклеотидами. При правильній кількості додають у розчин, ланцюг буде зупинено при наявності комплементарних нуклеотидів в матриці. Наприклад, якщо потрібну кількість дидезоксі А додається, то ланцюг буде зупинено в кожному випадку Т в матриці. Щоб визначити повну послідовність потрібні окремі реакції для кожної з чотирьох основ A, T, C і G.

Детекція продуктів реакції секвенування

Включення мічених нуклеотидів

Раніше використовувалися радіактивні мітки

Тепер використовуються флуоресцентні мітки

Використовуються різні флуоресцентні мітки для кожного нуклеотида

Можуть працювати всі чотири основи в тій же смузі

Коли реакція секвенування завершується, дослідник повинен ідентифікувати новосинтезовані ланцюги. Це може бути зроблено за допомогою радіоактивно мічених нуклеотидів в реакції. В якості альтернативи, автоматизовані секвенатори на сьогоднішній сьогоднішній всі використовують флуоресцентні мітки. Кожна з чотирьох реакцій секвенування (для A, T, C і G, відповідно) використовує інший колір флуоресцентної мітки. Після того, як реакція завершена, чотири флуоресцентно мічені реакції можуть бути об'єднані і працюють в одній смузі гелю або капілярній трубці.


Читайте також:

  1. Визначення послідовності вогнепальних поранень.
  2. Визначення послідовності обробки поверхонь заготовки
  3. Виявлення послідовності
  4. Встановлення факту віднесення аварійної події до рангу НС, ви­значення виду та рівня НС проводиться у такій послідовності.
  5. Залежно від юридичної спрямованості та послідовності досягнення цілей договори поділяються на основні та попередні.
  6. Збіжні послідовності
  7. Монотонні послідовності
  8. Нескінченно малі і нескінченно великі послідовності.
  9. Нехай задано послідовності і .
  10. Обґрунтування вибору технологічних баз і встановлення послідовності оброблення поверхонь заготовки
  11. Обмежені і необмежені числові послідовності




Переглядів: 548

<== попередня сторінка | наступна сторінка ==>
Побудова контінгів шляхом зонтування з кінців фрагментів | Послідовність читання флуоресцентно мічених реакцій

Не знайшли потрібну інформацію? Скористайтесь пошуком google:

 

© studopedia.com.ua При використанні або копіюванні матеріалів пряме посилання на сайт обов'язкове.


Генерація сторінки за: 0.002 сек.