МАРК РЕГНЕРУС ДОСЛІДЖЕННЯ: Наскільки відрізняються діти, які виросли в одностатевих союзах
РЕЗОЛЮЦІЯ: Громадського обговорення навчальної програми статевого виховання ЧОМУ ФОНД ОЛЕНИ ПІНЧУК І МОЗ УКРАЇНИ ПРОПАГУЮТЬ "СЕКСУАЛЬНІ УРОКИ" ЕКЗИСТЕНЦІЙНО-ПСИХОЛОГІЧНІ ОСНОВИ ПОРУШЕННЯ СТАТЕВОЇ ІДЕНТИЧНОСТІ ПІДЛІТКІВ Батьківський, громадянський рух в Україні закликає МОН зупинити тотальну сексуалізацію дітей і підлітків Відкрите звернення Міністру освіти й науки України - Гриневич Лілії Михайлівні Представництво українського жіноцтва в ООН: низький рівень культури спілкування в соціальних мережах Гендерна антидискримінаційна експертиза може зробити нас моральними рабами ЛІВИЙ МАРКСИЗМ У НОВИХ ПІДРУЧНИКАХ ДЛЯ ШКОЛЯРІВ ВІДКРИТА ЗАЯВА на підтримку позиції Ганни Турчинової та права кожної людини на свободу думки, світогляду та вираження поглядів
Контакти
Тлумачний словник Авто Автоматизація Архітектура Астрономія Аудит Біологія Будівництво Бухгалтерія Винахідництво Виробництво Військова справа Генетика Географія Геологія Господарство Держава Дім Екологія Економетрика Економіка Електроніка Журналістика та ЗМІ Зв'язок Іноземні мови Інформатика Історія Комп'ютери Креслення Кулінарія Культура Лексикологія Література Логіка Маркетинг Математика Машинобудування Медицина Менеджмент Метали і Зварювання Механіка Мистецтво Музика Населення Освіта Охорона безпеки життя Охорона Праці Педагогіка Політика Право Програмування Промисловість Психологія Радіо Регилия Соціологія Спорт Стандартизація Технології Торгівля Туризм Фізика Фізіологія Філософія Фінанси Хімія Юриспунденкция |
|
||||||||||||||||||||||||||||
Визначення загального азоту в сечі за методом Кьєльдаля.Завдання 1. Визначити вміст сечової кислоти в сироватці крові. Принцип. Метод базується на здатності сечової кислоти відновлювати фосфатно-вольфраматний реактив (реактив Фоліна) з утворенням сполук, інтенсивність забарвлення яких пропорційна концентрації цієї кислоти. Хід роботи. У центрифужну пробірку вносять по 1,5 мл сироватки крові, води і 20% розчину трихлороцтової кислоти. Перемішують, через 5 хв центрифугують 10 хв при швидкості 3000 об/хв. Беруть дві чисті градуйовані пробірки (дослідну і стандартну), додають у них реактиви відповідно до схеми:
Через 10 хв обидві проби фотометрують проти води на ФЕК при довжині хвилі 510-560 нм (зелений світлофільтр) у 5 мм кюветі. Вміст сечової кислоти (Х) у ммоль/л в сироватці крові розраховують за формулою: Х = (Едосл.×0,01×200)/(Ест.×168), де Едосл. – екстинкція дослідної проби; Ест. – екстинкція стандартної проби; 0,01 – маса сечової кислоти в пробі стандартного розчину, взятого для реакції (мг); 200 – коефіцієнт перерахування на 1 л сироватки крові; 168 – молекулярна маса сечової кислоти. Завдання 2. Визначити вміст сечової кислоти в сечі. Принцип. Метод базується на здатності сечової кислоти відновлювати фосфатно-вольфраматний реактив (реактив Фоліна) у фосфатно-вольфра-мову синь, інтенсивність забарвлення якої пропорційна концентрації сечової кислоти. Кількість фосфатно-вольфрамової сині визначають титруванням розчином калію гексаціаноферату (III). Останній окислює фосфатно-вольфрамову синь, і синє забарвлення зникає. Хід роботи. До 1,5 мл сечі додають 1 мл 20% розчину натрію карбонату і 1 мл реактиву Фоліна, перемішують і титрують розчином 0,01 моль/л калію гексаціаноферату (III) до зникнення синього забарвлення. Для розрахування вмісту сечової кислоти в сечі необхідно знати, яка її кількість відповідає 1 мл розчину 0,01 моль/л калію гексаціаноферату (III). Так, якщо на титрування 1,5 мл стандартного розчину сечової кислоти, що містить 0,75 мг цієї кислоти, після додавання 1 мл 20% розчину натрію карбонату і 1 мл реактиву Фоліна витрачено 0,81 мл калію гексаціаноферату (III), тоді його 1 мл відповідає: 0,75/0,81=0,8 г сечової кислоти. Вміст сечової кислоти (У) у мг/добу в сечі розраховують за формулою: У = (0,8×а×в)/1,5, де 0,8 г сечової кислоти відповідає 1 мл калію гексаціаноферату (III); а – кількість калію гексаціаноферату (III), що витрачена на титрування (мл); в – добовий діурез; 1,5 – кількість сечі, взятої для визначення (мл). Коефіцієнт перерахунку в одиниці СІ (ммоль/доба) дорівнює 0,0059. Клініко-діагностичне значення. Сечова кислота є кінцевим продуктом обміну пуринових нуклеотидів. У нормі концентрація сечової кислоти в сироватці крові становить 0,10-0,40 ммоль/л, а з сечею виділяється 2,36-5,90 ммоль/добу. Підвищений вміст сечової кислоти в крові (гіперурікемія) має місце при багатьох патологічних станах, пов’язаних з посиленим розпадом нуклеопротеїнів (лейкоз, діабет, алергія), при дефектах ферментів фосфорибозилдифосфатсинтетази та гіпоксантингуанінфосфорибозилтрансферази (подагра, синдром Леша-Ніхана), аденінфосфорибозилтрансферази (сечокам’яна хвороба), а также при хворобі Гірке (недостатність глюкозо-6-фосфатази у печінці). Збільшення концентрації сечової кислоти є головним діагностичним критерієм подагри. Очевидно, що при зміщенні реакції середовища в кислу сторону сечова кислота відкладається в тканинах, хрящах, суглобових сумках. Гіпоурікемія та підвищена екскреція гіпоксантину і ксантину можуть бути наслідком недостатності ксантиноксидази, викликаної порушеннями в структурі гену цього фермента, або результатом пошкодження печінки. Гіпоурікурія спостерігається при подагрі, нефриті, нирковій недостатності; гіперурікурія може спостерігатися при підвищеному надходженні та посиленому розпаді нуклеопротеїнів. У дітей виділяється відносно більше сечової кислоти, ніж у дорослих. Завдання 3. Визначити загальний азот сечі за методом Кьєльдаля. Принцип. Сечу спалюють (мінералізують) у концентрованій сульфатній кислоті. При цьому азот усіх органічних і неорганічних сполук у вигляді амоніаку зв’язується із сульфатною кислотою, переходить в амоній сульфат, який, реагуючи з реактивом Несслера, утворює сполуку жовто-оранже-вого кольору. Інтенсивність забарвлення розчину пропорційна концентрації азоту. Хід роботи. 1. Мінералізація. У пробірку вливають 0,5 мл сечі, додають 0,05 мл конц. сульфатної кислоти. Спалювання здійснюють на піщаній бані: пробірка повинна торкатися тільки верхнього шару піску. Спочатку випаровується вода, сеча набуває бурого забарвлення. Пробірку знімають з бані, дають їй охолонути, додають 2 краплі пергідролю і знов ставлять для спалювання до знебарвлення рідини. Слід перевірити колір рідини у пробірці після її охолодження, оскільки часто рідина, яка здається безбарвною у гарячому стані, при охолодженні темнішає. Після охолодження в пробірку додають 10 мл свіжокип’яченої дистильованої води, нейтралізують 12,5М їдким натром до слабо лужної реакції, яку визначають за зміною кольору лакмусового папірця з червоного на синій. Надлишок основи у разі нейтралізації призводить до помутніння розчину. Недостатність основи спричиняє випадіння солей ртуті з реактиву Несслера, і дослід вважають зіпсованим. 2. Кольорова реакція (несслеризація). У пробірку додають 0,5 мл реактиву Несслера (калій-меркурію йодид), унаслідок чого вміст пробірки забарвлюється у жовтий колір різної інтенсивності залежно від вмісту азоту. Паралельно з дослідною пробою обробляють стандартну пробу: 0,2 мл стандартного розчину амонію сульфату; 0,05 мл конц. сульфатної кислоти; 0,3 мл 12,5 М розчину їдкого натру; 0,5 мл реактиву Несслера і 9,8 мл дистильованої води. Дослідну і стандартну проби вимірюють порівняно з контролем на реактиви за довжини хвилі 440-450 нм у 5 мм кюветі. Контроль роблять як стандартну пробу, але замість стандартного розчину амонію сульфату додають воду. Контрольна проба повинна мати легкий жовтуватий відтінок. Більш насичений колір контролю свідчить про наявність у дистильованій воді азоту (амоніаку). Розрахунок здійснюють за формулою: Сд=Сст.×(Ед./Ест.), де Сд – концентрація загального азоту в сечі (ммоль/л); Ед. – екстинкція дослідної проби; Сст. – концентрація загального азоту в стандарті; Ест. – екстинкція стандартної проби. Клініко-діагностичне значення. За добу людина виділяє 10-17 г азоту, з якого 80-90% припадає на сечовину. За цим показником визначають нітрогеновий баланс організму, а також функціональний стан печінки, нирок та інших органів. Читайте також:
|
|||||||||||||||||||||||||||||
|